换一批
换一批乙型肝炎病毒DNA转染细胞的一种内参标准:真核细胞报告基因SEAP
An internal control for transfection of hepatitis B virus gene: eukaryotic cell reporter gene SEAP
摘要目的建立用真核细胞报告基因SEAP转染人肝癌细胞系(Huh7、HepG2)及鸡肝癌细胞系(LMH)的表达系统,供研究HBV基因功能应用.方法分别将带有分泌性碱性磷酸酶(SEAP)报告基因的pBC12/ PL/ SEAP及pBC12/ CMV/ SEAP质粒DNA转染Huh7、HepG2及LMH细胞,并用pBC12/ CMV/ SEAP质粒DNA与S基因区变异体的克隆HBV DNA共转染HepG2细胞.培养后收取细胞培养液,用ELISA法测定SEAP活性及HBsAg.结果在三种细胞中pBC12/ CMV/ SEAP均可表达,以72小时表达的酶活性测定最为适宜;而pBC12/ PL/ SEAP表达仅处于低水平.以SEAP表达量作为内参对HBsAg的表达量进行比较,发现S基因129L变异体表达HBsAg量显著高于野毒株.结论 SEAP作为内参具有快速简便,不需同位素及特殊仪器的优点,有较高的实用价值.
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