换一批
换一批红细胞CD55、CD59流式细胞术检测方法的若干影响因素探讨
Investigation of several influential factors on flow cytometry analysis of CD55 and CD59 expression on red blood cells
摘要目的 探讨流式细胞仪测定红细胞表面CD55、CD59试验过程中影响检测的若干因素,建立此项目的 标准操作程序.方法 利用流式细胞仪对15例非血液病、11例阵发性血红蛋白尿症(PNH)的乙二胺四乙酸(EDTA)外周抗凝血进行红细胞CD55、CD59检测,观察单克隆抗体(mAb)用量、荧光素种类及反应时间对测定结果的影响.结果 在未饱和抗原的情况下(<9 μL),平均荧光强度(MFI)随抗体量的增加而升高.CD55-异硫氰酸荧光素(FITC)的阳性率和MFI均低于CD55-藻红蛋白(PE),CD59的FITC和PE 2种荧光标记的阳性率间差异无统计学意义,但在MFI方面前者明显高于后者.反应时间对CD55-PE阳性率、CD59-FITC和CD55-PE的MFI有明显影响(P<0.05);3 h内2组CD59-FITC的阳性率无明显变化.结论 抗体用量、荧光素种类及标记模式和温育时间对流式细胞仪检测红细胞CD55、CD59有明显的影响.本实验室在3个影响因素上分别选择12μL抗体标记1.6×10(5)～2.8×10(5)个红细胞、荧光素组合模式为CD59-FITC、CD55-PE双色标记和40 min的温育时间,这样既确保了反应充分又提高了结果的稳定性.
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