双试剂速率法测定二胺氧化酶活性的研究

The study of rate method to detect the activity of diamine oxidase with double-reagent

二维码有效期 120s

摘要目的建立检测二胺氧化酶(DAO)活性的双试剂连续监测法,并进行方法学评价.方法通过试验来确定反应特异吸收峰、最佳检测时间、合理试剂配比、最佳底物浓度和反应缓冲体系的最佳pH值及浓度等最适反应条件.利用线性范围、精密度、回收试验、干扰试验和试剂及样本稳定性来评价该方法的敏感性、准确度和抗干扰能力.检测150名健康人和30例严重烧伤合并胃肠道黏膜屏障功能障碍或衰竭患者血清DAO活性,确定参考区间和诊断准确度.结果通过试验确定以100 mmol/L三羟甲基氨基甲烷-盐酸(Tris-HCl,pH值8.0)为反应缓冲体系,以3.2 mmol/L 1,4-丁二胺为最佳底物浓度,试剂Ⅰ和试剂Ⅱ按4:1与样本反应,在340 nm波长下200～300 s期间连续监测还原型辅酶Ⅰ(NADH)吸光度的下降速度计算求得DAO活性.本法线性范围为0～100 U/L,不精密度均＜5%,2个水平的回收率分别为95.8%、98.0%,胆红素＜150 μmol/L、血红蛋白＜4 g/L、脂肪乳＜4 g/L、NH4+＜60 μmol/L、单胺氧化酶(MAO)＜120 U/L时对本法无明显干扰,试剂置仪器中可稳定2周,正常人血清DAO活性为(3.90±2.96)U/L,按95%可信区间其诊断参考区间为0～9.7 U/L,受试者工作特征(ROC)曲线下面积为0.960,诊断准确度良好.结论建立的DAO活性浓度双试剂连续监测方法敏感性高、重复性好、抗干扰力强、诊断准确度良好,试剂稳定性满足日常工作需要,适用于全自动生化分析仪检测,可做为临床常规检测方法用于肠黏膜损伤的诊断.