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载脂蛋白A1抗体通过抑制Ca2+载体A23187诱导的Ca2+内流降低精子活力

Apolipoprotein A1 antibodies reduce sperm motility by inhibiting ionophore Ca2+A23187-induced Ca2+influx

摘要目的 分析载脂蛋白A1(apo A1)抗体对Ca2+载体A23187诱导的精子Ca2+内流的影响,探讨apo A1抗体与精子活力的关系.方法 收集健康男性精液样本38份.采用免疫荧光法观察apo A1在人精子中的定位和apo A1抗体对精子顶体反应的影响.采用免疫印迹法检测精子获能相关蛋白酪氨酸磷酸化情况.分别采用正常兔IgG(正常兔IgG组)和40 μg?mL-1 apo A1抗体(apo A1抗体组)处理样本,以正常精液样本作为空白对照组,比较各组精子总活力和前向运动精子百分率差异. 分别采用正常兔IgG和10、20、40 μg?mL-1 apo A1抗体处理已经10 μmol?L-1 A23187诱导30 min的Fluo-4AM负载的精子样本,以未作处理的Fluo-4AM负载的精子样本作为空白对照,采用流式细胞术检测精子内Ca2+水平.结果 apo A1蛋白定位于人精子头部.apo A1抗体组精子总活力和前向运动精子百分率均显著低于空白对照组和正常兔IgG组(P<0.001),空白对照组与正常兔IgG组之间2项指标差异无统计学意义(P>0.05).流式细胞术结果显示,A23187诱导后,精子内Ca2+荧光强度升高;采用apo A1抗体处理后,Ca2+浓度显著降低(P<0.01),且呈剂量依赖性.40 μg?mL-1 apo A1抗体+A23187组顶体反应率显著低于A23187组和正常兔IgG+A23187组(P<0.001),且apo A1抗体对精子自发顶体反应无影响.免疫印迹法结果显示,apo A1抗体处理前后精子的蛋白酪氨酸磷酸化无显著变化.结论 apo A1抗体可以通过降低Ca2+内流使精子活力下降,并抑制Ca2+载体A23187诱导的顶体反应.

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检验医学

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2024年39卷4期

351-357页

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