美味扇菇SRAP-PCR反应体系优化及菌盖颜色特异性引物筛选
Optimization of SRAP-PCR Reaction System for Sarcomyxa edulis and Screening of Cap Color Specific Primers
摘要以采自吉林省白山市的两个野生美味扇菇菌株(编号M3,M6)为试材,采用单因素试验法,对SRAP-PCR反应的Taq DNA聚合酶用量、Mg2+浓度、dNTPs浓度、引物浓度和模板DNA用量等关键因素进行优化,并对SRAP引物进行特异性条带筛选.结果表明:美味扇菇SRAP-PCR的最优反应体系为Taq DNA 聚合酶1.0 U、Mg2+3.0 mmol/L、dNTPs 0.5 mmol/L、引物 0.2 μmol/L、模板DNA 40 ng/μL、ddH2O补足至20 μL.采用优化后的体系对 153 对 SRAP 引物进行筛选,有 124 对引物可以扩增出目的条带(引物有效性 81.05%),其中105 对引物组合能扩增出清晰且多态性较高的条带.研究结果可为美味扇菇分子标记开发及遗传多样性分析提供理论依据.
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