换一批
换一批摘要目的 筛选及分析鉴定与 Neuritin 相互作用的候选膜蛋白,为探讨 Neuritin 发挥生物学作用的分子机制提供理论基础.方法 首先利用免疫荧光明确 Neuritin 在细胞的定位情况;基于表面等离子共振传感(Surface plasmon resonance,SPR)技术,利用 Neuritin 蛋白直接捕获与 Neuritin 相互作用的蛋白复合物,质谱分析筛选出可能与Neu-ritin相互作用的靶标蛋白;通过生物信息学对靶标蛋白进行细胞组分、生物过程、功能以及参与的信号通路进行富集分析;为了缩小验证范围,进一步利用甲醛交联法捕捉与 Neuritin 相互作用的蛋白,通过以上方法综合分析,确定与 Neuritin 相互作用的蛋白;利用免疫荧光及免疫共沉淀方法对 Neuritin 与捕获蛋白在 SH-SY5Y 细胞中的相互作用进行验证.结果 基于 SPR 技术筛选到 172 条可能与 Neuritin 相互作用的蛋白,通过质谱与生物信息学分析,确定ANXA2 为候选与 Neuritin 相互作用的蛋白,经过免疫荧光和免疫共沉淀验证 Neuritin 与 ANXA2 存在相互作用.结论 筛选出与 Neuritin 相互作用的候选蛋白 ANXA2,二者在SH-SY5Y细胞上共定位且具有特异性的相互作用.
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关键词
NeuritinANXA2蛋白质相互作用生物信息学分析质谱技术NeuritinANXA2protein interactionbioinformatics analysismass spectrometry
分类号
R34
栏目名称
医学·药学
DOI
10.13880/j.cnki.65-1174/n.2023.22.036
发布时间
2023-11-09
基金项目
国家自然科学基金
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