换一批补肾方含药血清干预大鼠椎间盘软骨细胞miRNA的差异表达
Study on the differentially expressed miRNA of drug-contained serum of "Bushen Decoction" on rat intervertebral disc chondrocytes
摘要目的 筛选补肾方含药血清干预大鼠椎间盘软骨细胞后差异表达的miRNA,为补肾方治疗颈椎病提供可供选择的目标miRNA,以探讨其通过调控靶基因表达发挥治疗效应的机制.方法 原代培养的大鼠椎间盘软骨细胞经Ⅱ型胶原酶免疫荧光染色和甲苯胺蓝染色鉴定后,分别用补肾方含药血清、空白血清干预椎间盘软骨细胞,在绘定时间点收获细胞,抽提纯化总RNA,行miRNA芯片检测,通过芯片差异性分析,挑选差异表达4倍以上的miRNA行定量聚合酶链式反应(PCR)验证.结果 二次酶消化法可简便高效培养大量原代椎间盘软骨细胞,所培养细胞具有典型的椎间盘软骨细胞形态和功能,Ⅱ型胶原酶免疫荧光染色和甲苯胺蓝染色均为阳性.补肾方含药血清干预组芯片数据分别与相应时间点的空白血清组芯片数据行组间比较后再行组内比较,与含药血清干预椎间盘软骨细胞1d相比,干预3d的共有121个2倍以上表达差异的miRNA,其中上调的53个,下调的68个.差异表达4倍以上的miRNA定量PCR结果与芯片数据一致.结论 补肾方含药血清干预椎间盘软骨细胞获得了一套较为特异的miRNA,初步预测上调的miRNA可能通过靶向Opn、Col、Bcl212、Vdr、IGF-I、Mmp-13等基因在椎间盘营养代谢相关信号通路中发挥作用.
更多相关知识
关键词
补肾方软骨细胞大鼠miRNA芯片差异表达"Bushen Decoction"intervertebral disc chondrocytesrat miRNA arraydifferential expression
栏目名称
DOI
10.16305/j.1007-1334.2016.01.022
发布时间
2016-02-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家重点基础研究发展计划（973计划）（2013CB531601）
国家自然科学基金（81173312）
国家自然科学基金（30972633）
同济大学附属杨浦医院学科带头人计划资助项目（YJ1201402）
- 浏览53
- 被引11
- 下载0
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
