摘要目的 探讨新设计合成的化合物APP5肽美金刚(RERMS-MEM)对L-谷氨酸(L-glu)诱导的SY5Y细胞损伤的神经保护作用.方法 SY5Y细胞无菌培养,以高浓度的L-glu(10 mM)建立损伤模型,自行设计并合成RERMS-MEM,MTT法初步筛选药物作用的有效浓度之后,分为阴性对照组、L-glu组、L+RM组(L-glu+RERMS-MEM)、L+M组(L-glu+MEM).采用MTT法检测各组细胞存活率,乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测细胞上清中LDH漏出率,蛋白免疫印迹法检测各组神经生长因子(NGF)、脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白的表达情况,实时荧光定量PCR技术检测NGF、BDNF mRNA的表达情况,DCFH-DA试剂盒检测各组活性氧(ROS)的表达情况.结果 MTT法检测RERMS-MEM对L-glu损伤的SY5Y细胞存活率的影响结果显示,L-glu组细胞存活率为(74.89±4.94)%,低于阴性对照组细胞存活率(100.00±5.01)%,差异有统计学意义(P＜0.05);与L-glu组比较,L+RM组1、5、10、20 μM的细胞存活率分别为(86.40±14.81)%、(90.24±5.87)%、(90.47±8.10)%、(91.84±11.6.0)%,呈现出细胞存活率随RERMS-MEM剂量依赖性增长的趋势,其中在5、10、20 μM干预时,与L-glu组比较,差异均有统计学意义(均P＜0.05).与L-glu组比较,L+M组低浓度(1、5、10 μM)时,细胞存活率有一定的提高,但差异均无统计学意义(均P＞0.05);20 μM干预时,细胞存活率降低为(61.37±10.32)%,差异有统计学意义(P＜0.05),最终选定5 μM作为RERMS-MEM和MEM的干预剂量.Muse细胞仪检测结果显示,与对照组比较,L-glu组活细胞数目明显减少,差异有统计学意义(P＜0.01);与L-glu组比较,L+RM组RERMS-MEM干预后活细胞数目明显增多,差异有统计学意义(P＜0.01);而L+M组MEM干预后,活细胞数目较L+RM组干预后增加较少且差异无统计学意义(P＞0.05).LDH检测结果表明,与对照组比较,L-glu组LDH漏出率明显提升,差异有统计学意义(P＜0.01);与L-glu组比较,L+RM组的LDH漏出率显著降低,差异有统计学意义(P＜0.01),L+M组LDH漏出率也降低,但差异无统计学意义(P＞0.05);Western Blot和RT-qPCR检测结果表明,与对照组比较,L-glu组NGF蛋白和mRNA相对表达量均显著下降,差异有统计学意义(均P＜0.05);与L-glu组比较,L+RM组、L+M组表达量均显著升高,差异均有统计学意义(均P＜0.05),且L+RM组较L+M组,NGF蛋白和mRNA表达量更高.BDNF检测结果显示,L+M组与L-glu组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);mRNA相对表达量升高不明显,L+M组与L-glu组比较差异有统计学意义(P＜0.05);与对照组比较,2种方法检测的L-glu组ROS表达量均显著提升,差异有统计学意义(P＜0.05);与L-glu组比较,L+RM组、L+M组ROS表达均显著下降,差异均有统计学意义(均P＜0.05),其中L+RM组下降更明显;与对照组比较,L-glu组细胞总凋亡率明显上升,差异有统计学意义(P＜0.01),与L-glu组比较,L+RM组、L+M组细胞总凋亡率均明显下降,差异均有统计学意义(均P＜0.01).结论 自行设计并合成的RERMS-MEM与MEM比较,在体外具有良好的神经保护作用,同时具有较低的细胞毒性作用;RERMS-MEM发挥神经保护作用可能是通过抑制细胞凋亡、氧化应激损伤,以及提高神经营养因子的表达来实现.