换一批
换一批建立一种简便的大鼠背根神经节神经元原代培养方法的建立
Setting up a simple method to obtain primary cultured dorsal root ganglion neurons in the rat
摘要目的:建立一种简便易行地获取大鼠背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)神经元原代培养的方法.方法:窒息法处死大鼠,打开胸腔经心脏放血后,从背部取出一段脊柱.将脊柱稍加修剪后,从中轴线处打开脊柱,暴露脊髓,在其两侧找到椎间孔内的为DRG,用器械离断神经纤维,取出DRG.Ⅰ胶原酶联合Trypsin-EDTA先消化DRG,再用吹法DRG以获得单个神经元;用TNB-100 basal Medium的复合培养液在经过0.1 mg/ml Poly-D-lysine hydrobromide和0.01 mg/ml lamina包被的培养皿内,于5％ CO2,37℃孵箱内培养48 h.免疫组织化学方法检测神经元内标志物BetaⅢTubulin的表达,用Alexa flour 488标记的二抗进行显色,倒置荧光显微镜下观察.结果:获得了单层贴壁的神经元,其胞体形状多样,突起生长良好,细胞之间正在逐步形成网络连接;免疫荧光染色显示,细胞的胞体和突起中均可高表达BetaⅢTubulin,且荧光染色较强.结论:运用该方法可以简便地从大鼠DRG内获得单层贴壁的原代神经元.
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DOI
10.11670/1000-7547.201402007
发布时间
2014-05-05
基金项目
新疆医科大学校内支撑学科项目-人体解剖与组织胚胎学阶段性成果（XYDXK50780307）
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