基于SIRT1/NRF2/HO-1信号通路探讨黄芪甲苷对大鼠肝星状细胞氧化损伤的作用机制

Exploring the Mechanism of Action of Astragaloside on Oxidative Damage in Rat Hepatic Stellate Cells Based on SIRT1/NRF2/HO-1 Signaling Pathway

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摘要目的探讨黄芪甲苷治疗肝纤维化(HF)的作用机制.方法 HSC-T6分为空白组、模型组、黄芪甲苷组、抑制剂组(采用Sirt 1抑制剂EX527)、黄芪甲苷加抑制剂组,除空白组外均采用100 μmol·L-1的H2O2制造HSC-T6氧化应激的模型,模型组干预4 h,除模型组外干预24 h.ELISA法测定细胞上清中α-SMA、Collagen 1水平;生化试剂盒法测定细胞中氧化应激相关指标;流式细胞术检测细胞中ROS的含量;免疫荧光法检测细胞中α-SMA的含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time qPCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞中Sirt1、Nrf2、HO-1、α-SMA、Collagen1 mRNA和蛋白表达水平.结果与空白组比较,经H2O2处理的HSC-T6上清中α-SMA、Collagen 1及细胞中MDA、ROS的含量明显增加,而细胞中CAT含量及SOD活性明显降低,细胞中Sirt1、Nrf2、HO-1 mRNA和蛋白表达水平降低,α-SMA、Collagen 1 mRNA表达水平升高(P＜0.05);与模型组比较,各给药组细胞中MDA、ROS的含量明显降低,CAT含量及SOD活性明显增加,黄芪甲苷组、黄芪甲苷加抑制剂组上清中α-SMA、Collagen 1表达量降低,Sirt1、Nrf2、HO-1 mRNA和蛋白表达水平增加,α-SMA、Collagen 1 mRNA表达水平降低(P＜0.05).结论黄芪甲苷可以减轻因H2O2刺激造成的HSC-T6氧化应激反应,减少氧化应激产物产生及胶原纤维沉积,从而达到抗HF的目的,其作用机制可能与调节Sirt1/Nrf2/HO-1信号通路有关.