基于Piezo1/YAP/Caspase3轴探讨针刺保护膝骨性关节炎模型大鼠股四头肌细胞的机制研究
Study on the Mechanism of Acupuncture Protection of Quadriceps Muscle Cells in Knee Osteoarthritis Model Rats Based on Piezo1/YAP/Caspase3 Axis
摘要目的 探讨基于Piezo1/YAP/Caspase3轴探讨针刺保护膝骨性关节炎模型大鼠股四头肌细胞的机制.方法 本研究选取40只SPF级Wistar大鼠,适应性饲养7天后进行分组,根据随机对照表分为假手术组、模型组、西药组、针刺组,各10只.模型组、西药组、针刺组采用改良Hulth方法构建膝关节骨性关节炎模型,假手术组仅切开关节腔后缝合.模型复制成功后,假手术组给予生理盐水灌胃,西药组给予塞来昔布溶液灌胃,针刺组针刺髌下、鹤顶次、血海次,各组每日干预1次,连续干预14天,治疗期间大鼠仍进行大鼠跑步机训练.干预结束后,苏木精-伊红染色法(HE)检测各种大鼠股四头肌组织、关节软骨形态变化;TUNEL法检测股四头肌肌细胞凋亡情况,免疫荧光法检测股四头肌细胞Piezo1、YAP、p-YAP蛋白表达,Western blot法检测股四头肌组织抗凋亡蛋白CTGF、AREG、Gli2、AFP表达,以及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bcl-xl、Bax、cytc、Caspase3表达水平.结果 与模型组相比,西药组与针刺组大鼠大腿围度、股四头肌湿重、湿重维持率及湿重体重比值较高(P<0.05),与西药组比较,针刺组大鼠大腿围度、股四头肌湿重、湿重维持率及湿重体重比值较高(P<0.05);与模型组相比,西药组与针刺组大鼠股四头肌凋亡指数较低,且针刺组股四头肌凋亡指数较低(P<0.05);与模型组相比,西药组与针刺组股四头肌组织Piezo1、p-YAP蛋白表达较高,YAP蛋白表达较低,CTGF、AREG、Gli2、AFP蛋白表达较高,Bcl-2、Bcl-xl蛋白表达较高,Bax、cytc、Caspase3蛋白表达较低(P<0.05);与西药组相比,针刺组股四头肌组织Piezo1、p-YAP蛋白表达较高,YAP蛋白表达较低,CTGF、AREG、Gli2、AFP蛋白表达较高,Bcl-2、Bcl-xl蛋白表达较高,Bax、cytc、Caspase3蛋白表达较低(P<0.05).结论 针刺通过增加膝骨性关节炎模型大鼠股四头肌Piezo1蛋白表达,促进YAP的磷酸化入核,进而促进增殖、抗凋亡蛋白CTGF、AREG、Gli2与AFP蛋白的表达,抑制Caspase3依赖性线粒体凋亡,从而保护肌细胞.
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