换一批知母糖基转移酶UGT708Z1基因的克隆与功能分析
Cloning and Expression Analysis of a Glycosyltransferase UGT708Z1 Gene from Anemarrhena asphodeloides
摘要目的 克隆知母糖基转移酶基因UGT708Z1,对其进行生物信息学、原核表达分析以及功能鉴定.方法 基于转录组数据,从知母中挖掘并筛选到一条候选糖基转移酶基因UGT708Z1.根据其全长开放阅读框设计带有同源臂的特异性引物,采用PCR进行基因克隆;通过同源重组技术构建pET-32a(+)-UGT708Z1重组质粒,并利用原核表达和纯化蛋白技术获得可溶性目的蛋白.最后,采用体外酶促反应对UGT708Z1进行功能鉴定.结果 序列分析表明UGT708Z1的开放阅读框为1377 bp,编码458个氨基酸.原核表达结果显示,UGT708Z1成功表达出可溶性目的蛋白,纯化后重组蛋白大小为70.86 kDa.体外酶促反应结果表明,UGT708Z1具有类黄酮7-OH糖基化活性,能够催化淫羊藿素生成淫羊藿次苷Ⅰ.此外,UGT708Z1还具有催化槲皮素和芹菜素的7-O-糖基化活性的功能.结论 本研究从知母中成功克隆并鉴定出一个黄酮醇糖基转移酶UGT708Z1,为后续深入解析黄酮醇苷的生物合成奠定基础.
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关键词
知母糖基转移酶基因克隆原核表达功能表征Anemarrhena asphodeloidesGlycosyltransferaseGene cloningProkaryotic expressionFunctional characterization
栏目名称
DOI
10.11842/wst.20250106005
发布时间
2025-10-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
江西省科技厅青年基金（20242BAB20452）
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