换一批RNaseH依赖性PCR扩增结合熔解曲线法鉴别培植牛黄与体外培育牛黄
Identification of Cultivated Bezoar and In Vitro Cultivated Bezoar by RNase H-Dependent PCR Amplification Combined with Melting Curve Analysis
摘要目的 运用核糖核酸酶H依赖性PCR扩增结合熔解曲线分析(rhPCR-HRM)技术,实现培植牛黄与体外培育牛黄的快速鉴别.方法 基于牛与猪物种间线粒体COI基因序列的差异,设计特异性rhPCR-HRM引物,通过rhPCR扩增反应,依据扩增产物的熔解温度(Tm)值差异进行鉴别,评估引物的特异性,优化反应条件,并考察该方法的灵敏度与实际应用适应性.结果 本研究设计的引物展现了优异的特异性,能够区分牛源性和猪源性样本,其扩增产物分别呈现出单一特异性熔解曲线峰,对应的Tm值分别为(83.93±0.2)和(79.15±0.2)℃;此外,该检测方法具有高灵敏度,能够检测低至0.05 ng的DNA模板.对44份市场收集的药材样本进行检测后发现,在30份标示为培植牛黄的样本中,仅有7份符合培植牛黄特征,其余23份实为体外培育牛黄;而14份标示为体外培育牛黄的样本均被确证.结论 本研究建立的rhPCR-HRM方法能够有效区分培植牛黄与体外培育牛黄,具备较高的特异性和灵敏度,为牛黄真伪鉴定提供了新方法,并为市场监管提供了有力的技术支撑.
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关键词
RNaseH依赖性PCR熔解曲线法培植牛黄体外培育牛黄鉴别RNaseH-dependent PCRMelting curve methodCultured bezoarIn vitro cultured bezoarIdentification
DOI
10.11842/wst.20250912003
发布时间
2026-04-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
湖北省技术创新计划重大项目（2024BCA002）
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