换一批黄连转录因子CcbHLH128的克隆、亚细胞定位及功能分析
Cloning,Subcellular Localization,and Functional Analysis of the Coptis chinensis Transcription Factor CcbHLH128
摘要目的 旨在克隆黄连Coptis chinensis Franch.中螺旋-环-螺旋模体(Basic helix-loop-helix,bHLH)转录因子CcbHLH128,并探究该转录因子在黄连苄基异喹啉生物碱生物合成中的功能.方法 基于黄连基因组数据克隆黄连转录因子CcbHLH128,通过生物信息学在线网站及软件分析其编码的氨基酸序列,预测蛋白质理化性质、结构域等分子特征;利用MEGA11进行多序列比对,分析进化关系;使用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测其在不同组织的相对表达量;利用双荧光素酶报告基因实验检测其对黄连生物碱合成通路基因CcCYP719A2、CcCYP80G2、CcNCS2、CcNCS5、CcNMCH、CcOMT4的转录是否具有转录激活作用.结果 从黄连中成功克隆得到黄连CcbHLH128基因,该基因在黄连须根中表达量最高.其开放阅读框(Open reading frame,ORF)序列全长共计2199 bp,编码732个氨基酸,相对分子质量为81588,不具有跨膜结构域和信号肽,是定位于细胞核的亲水性不稳定蛋白,有4种二级结构,无规则卷曲占比最高,为61.20%.CcbHLH128属于bHLH家族ⅩⅢ亚家族,对CcCYP719A2、CcNCS2、CcNMCH具有显著的转录激活作用.结论 本研究为深入解析bHLH类转录因子在黄连苄基异喹啉生物碱合成调控网络中的作用奠定基础.
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关键词
黄连bHLH转录因子生物碱亚细胞定位基因表达双荧光素酶报告基因实验Coptis chinensis Franch.bHLH transcription factorAlkaloidsSubcellular localizationGene expressionDual-luciferase assays
分类号
R284.3（中药学）
DOI
10.11842/wst.20251021008
发布时间
2026-04-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
湖北时珍实验室首席科学家项目（HSL2024SX0006）
湖北省科技厅湖北省自然科学基金面上项目（2024AFB956）
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