黄连CcMYB15基因克隆、亚细胞定位与表达分析
Cloning,Subcellular Localization,and Expression Analysis of the CcMYB15 Gene in Coptis chinensis
摘要目的 初步探究CcMYB15转录因子通过影响关键酶基因表达促进黄连生物碱积累.方法 基于黄连转录组数据筛选,克隆获得MYB转录因子编码基因CcMYB15(Cch00024418),并对其进行生物信息学分析、亚细胞定位实验、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和基因共表达分析.结果 在黄连须根中成功克隆得到R2R3-MYB家族基因CcMYB15,其开放阅读框全长为792 bp,编码263个氨基酸的蛋白,相对分子质量33210.91 Da,预测为亲水性不稳定蛋白.蛋白结构分析显示,CcMYB15包含典型R2R3-MYB DNA结合结构域,无跨膜区,二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主.亚细胞定位实验证实,CcMYB15蛋白定位于细胞核.qRT-PCR结果表明,CcMYB15基因在须根中呈特异性高表达,且与BIA生物合成途径上关键结构基因Cch00010773(7OMT)、Cch00012457(NCS)和Cch00029256(STOX)的表达量呈显著正相关(r≥0.8,P<0.05).结论 CcMYB15是一个定位于细胞核的转录因子,可能在黄连须根中参与调控生物碱的生物合成,该研究为深入解析MYB转录因子家族对BIAs生物合成的调控网络提供了重要理论基础.
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