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基于转录组学探讨柴姜方调控TGF-β/Rho-ROCK通路对青光眼滤过术后滤过泡瘢痕化的抑制作用

Inhibitory Effect of Chaijiang Prescription on Scarring of Filtering Blebs after Glau-coma Filtration Surgery by Regulating TGF-β/Rho-ROCK Pathway Based on Transcriptomic Analysis

摘要目的 探讨柴姜方基于转录组学调控TGF-β/Rho-ROCK通路对青光眼滤过术后抗瘢痕化的分子机制.方法 将57只SPF级远交系健康、无眼疾的成年新西兰长耳白兔,按随机数字表法分为空白组9只,模型组、柴姜方低剂量组、柴姜方中剂量组、柴姜方高剂量组各12只.青光眼滤过手术造模成功后,于术前和术后1、3、7、14 d测量术眼眼压,并利用裂隙灯显微镜观察手术滤过泡形成情况.于术后14 d处死兔子并获取手术区标本组织,通过HE染色和Masson染色评价滤过通道组织病理结构变化;转录组学筛选手术区标本组织差异表达基因并富集差异表达通路,运用qRT-PCR、Western blot检测TGF-β1、RhOA、ROCK2、α-SMA mRNA和蛋白的相对表达量.结果 眼压测量结果显示,术后7、14d与模型组比较,柴姜方中、高剂量组眼压均明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)o HE染色和Masson染色结果显示,术后14 d与模型组比较,柴姜方中、高剂量组成纤维细胞数目和胶原纤维面积占比明显降低,差异有统计学意义(P<0.01).转录组学结果显示,模型组相对于空白组明显上调基因数448,下调基因数314;柴姜方中剂量组相对于模型组明显上调基因数448,下调基因数792;对各组差异表达基因进行KEGG富集分析发现主要集中于TGF-β/Rho-ROCK通路.qRT-PCR、Western blot检测结果显示,与模型组比较,柴姜方中、高剂量组TGF-β1、RhOA、ROCK2、α-SMA mRNA和蛋白的相对表达量均明显降低,差异有统计学意义(P<0.01).结论 柴姜方中、高剂量组通过抑制TGF-β/Rho-ROCK通路的活化、成纤维细胞和胶原纤维的增殖对青光眼滤过术后发挥抗瘢痕化作用,可有效降低眼压并维持滤过泡功能.

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