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利用CRISPR/Cas9技术构建斑马鱼tspo基因纯合突变体

CRISPR/Cas9-Mediatedtspo Gene Knock-out in Zebrafish

摘要目的 利用CRISPR/Cas9基因编辑技术建立斑马鱼tspo基因纯合突变体,为研究斑马鱼tspo基因功能提供实验基础.方法 在斑马鱼tspo基因第二、三个外显子序列上设计sgRNA位点,通过体外转录获得sgRNA后,通过显微注射对野生型斑马鱼一细胞时期胚胎进行编辑获得G0,检测敲除活性后通过鉴定和筛选获得纯合突变体,计算纯合突变斑马鱼早期心率变化.结果 成功设计具有活性的sgRNA位点,经过鉴定和筛选获得两种纯合突变体tspocpu87和tspocpu88,tspo基因缺失斑马鱼胚胎与野生型斑马鱼胚胎相比,发育过程中心率无明显差异.结论 通过CRISPR/Cas9技术成功获得斑马鱼tspo基因敲除突变体,为研究TSPO功能提供新的参考.

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分类号 R596.1
栏目名称
DOI 10.3969/j.issn.1671-3141.2020.27.105
发布时间 2020-07-29
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