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丹参F3'5'H基因克隆及其序列分析

Cloning and Expression Analysis of F3'5'H from Salvia Miltiorrhiza

摘要目的:为了验证丹参类黄酮-3',5'-羟基化酶(Flavonoid 3',5'-hydroxylase,F3'5'H)基因与丹参花色表型的相关性,本研究克隆并分析了紫花丹参99-3株系和一些白花丹参中的F3'5'H基因.方法:本研究通过提取紫花丹参和白花丹参中的总RNA,再将其反转录得到cDNA,以此cDNA为模板,利用PCR方法扩增获得F3'5'H基因全长序列.再利用生物信息学分析方法,分析了该基因编码蛋白质的理化性状、结构域、系统进化等特点,并预测了该蛋白质的亚细胞定位、跨膜区等;利用实时定量PCR方法检测了该基因的表达特异性;利用毛状根遗传转化方法获得了该基因的过表达阳性毛状根株系.结果:F3'5'H基因全长1551 bp,编码516个氨基酸,相对分子质量为57.4 kDa.该基因在丹参花中高丰度表达.在42份(紫花25份;白花17份)丹参样品中发现一个单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphisms,SNP)位点在紫花和白花丹参中呈现与花色相关的稳定变化.系统发育分析表明丹参F3'5'H与美女樱的F3'5'H具有较高序列同源性.获得了过表达F3'5'H的毛状根株系.结论:本研究在丹参中克隆到F3'5'H基因,对其序列进行了分析,为进一步研究丹参F3'5'H基因的功能奠定基础.

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世界中医药

世界中医药

2020年15卷5期

689-695,701页

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