基于网络药理学和动物实验分析回阳生肌汤在糖尿病溃疡中的机制
Mechanism of Huiyang Shengji Decoction in Diabetic Ulcers Based on Network Pharmacology and Animal Experiments
摘要目的:基于网络药理学方法结合实验研究验证燕京名方回阳生肌汤治疗糖尿病皮肤溃疡(DSU)的作用机制.方法:首先利用数据库筛选出回阳生肌汤及糖尿病足溃疡相关靶点,并对交集基因进行富集分析.建立糖尿病小鼠创面模型,并将小鼠分为正常组、模型组、回阳生肌汤低中高3剂量组,每组6只,每日灌胃1次,连续治疗11 d,观察创面生长情况并计算愈合率,同时通过苏木精-伊红(HE)染色法染色观察创面组织病理学改变.采用实时荧光定量PCR(Rt-qPCR)检测血清炎症介质白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-10(IL-10)等mRNA的表达水平;通过蛋白质印迹法检测小鼠创面组织磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)和蛋白激酶B(AKT)蛋白的表达水平.结果:筛选获得回阳生肌汤的77个有效活性成分,包括槲皮素、L-正缬氨酸等,与糖尿病足溃疡交集靶点236个.核心靶点包括肿瘤蛋白53(TP53)、JUN原癌基因(JUN)等.京都基因与基因组百科全书(KEGG)分析显示,核心通路主要包括磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路、癌症通路和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路.动物实验结果表明,与正常组比较,模型组小鼠创面炎症细胞浸润明显;回阳生肌汤组创面表皮再生,炎症细胞浸润减少,更接近正常皮肤组织.此外,回阳生肌汤组小鼠创面组织PI3K和蛋白激酶B1(AKT1)蛋白表达水平显著升高(均P<0.01),呈剂量依赖性.结论:回阳生肌汤通过激活PI3K/AKT信号通路,调控炎症介质IL-1β和IL-10的表达水平,促进转化生长因子β(TGF-β)的表达,加速糖尿病足溃疡的愈合.研究结果为回阳生肌法临床治疗糖尿病足溃疡提供了实验理论依据.
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