二仙汤治疗早发性卵巢功能不全小鼠的机制研究
Mechanism of Erxian Decoction in the Treatment of Primary Ovarian Insufficiency in Mice
摘要目的:基于哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/eIF4E结合蛋白1(4E-BP1)信号通路探讨二仙汤对早发性卵巢功能不全小鼠卵巢形态、卵泡发育的影响.方法:将BABL/c雌性小鼠48只按照随机抽样方法分为空白组(n=8)和造模组(n=40),造模小鼠采用4-乙烯基环己烯双环氧化物腹腔注射造模,造模成功后小鼠按照随机抽样方法分为模型组、阳性药物组(戊酸雌二醇,0.3 mL/次)、二仙汤低剂量组(4 g/kg)、二仙汤中剂量组(8 g/kg)和二仙汤高剂量组(12 g/kg),每组8只.随后按相应剂量给药,连续给药6周.测定小鼠卵巢、子宫指数;苏木精-伊红(HE)染色观察卵巢组织病理学及卵泡计数;酶联免疫吸附测定(ELISA)测定血清激素[雌二醇(E2)、黄体生成素(LH)、血清促卵泡生成素(FSH)、抗米勒管激激素(AMH)]水平及肝肾功能指标[丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、血尿素氮(BUN)、血清肌酐(Cr)]活性;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)16期有作者是RT-qPCR检测卵巢组织大脑中富集的Ras同源物(Rheb)、核糖体蛋白S6激酶1(S6k1)、4E-BP1 mRNA表达;蛋白质印迹法检测卵巢组织磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、mTOR、磷酸化PI3K(p-PI3K)、磷酸化AKT(p-AKT)、磷酸化mTOR(p-mTOR)蛋白表达.结果:与空白组比较,模型组生长卵泡数量减少,卵巢指数、子宫指数、E2、AMH水平,p-PI3K、p-AKT和p-mTOR蛋白表达,Rheb、S6k1和4E-BP1 mRNA表达降低(P<0.01),ALT、BUN、AST、Cr活性无变化(P>0.05);与模型组比较,二仙汤高剂量组闭锁卵泡数量减少,卵巢指数、子宫指数、E2、AMH水平、p-PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表达、Rheb、S6k1、4E-BP1 mRNA表达升高(P<0.05),ALT、BUN、AST、Cr活性无变化(P>0.05).结论:二仙汤改善早发性卵巢功能不全卵巢形态、卵泡发育,可能与激活mTOR/4E-BP1信号通路有关.
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