防己黄芪颗粒含药血清在免疫球蛋白A肾病系膜细胞凋亡中的作用
Effects of Serum Containing Fangji Huangqi Granules on Apoptosis of Mesangial Cells in Immunoglobulin A Nephropathy
摘要目的:分析防己黄芪颗粒含药血清对原发性免疫球蛋白A肾病(IgAN)系膜细胞凋亡的影响.方法:分别用1、10、50、100 μg/mL的半乳糖缺乏IgA1(Gd-IgA1)干预HMC细胞,用CCK-8法筛选Gd-IgA1的最佳实验浓度.分别用0、5%、10%、15%、20%防己黄芪颗粒含药血清干预HMC细胞,用CCK-8法筛选含药血清最佳实验浓度.将细胞随机分为空白组、模型组、含药血清组、激素组,除空白组外,其他各组加入最佳实验浓度(100 μg/mL)的Gd-IgA1构建IgAN细胞模型.空白组、模型组正常培养,含药血清组加入10%的防己黄芪颗粒含药血清,激素组加入0.5 ng/mL的甲基泼尼松龙.检测以上各组细胞氧化应激指标[活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)],蛋白质印迹法(WB)检测谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、核因子E2相关因子2(NRF2)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)蛋白及细胞凋亡相关蛋白[B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)]、自噬相关蛋白[微管相关蛋白1轻链3 Ⅱ/Ⅰ(LC3 Ⅱ/Ⅰ)、自噬底物泛素结合蛋白(p62)]表达.将IgAN细胞分为空白组、模型组、模型+siNC+含药血清组、模型+siHMGB1+含药血清组,分别将siNC空白质粒、siHMGB1质粒转染至模型+siNC+含药血清组、模型+siHMGB1+含药血清组细胞.WB法检测以上各组GPX4、NRF2、HMGB1蛋白及细胞凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2)、自噬相关蛋白(LC3 Ⅱ、LC3 Ⅰ、p62)表达.结果:100 μg/mL的Gd-IgA1干预后细胞增殖活性较其他浓度Gd-IgA1干预后细胞增殖活性高(P<0.05);10%防己黄芪颗粒含药血清干预后细胞增殖活性下降幅度最大.与空白组比较,模型组细胞增殖活性高(P<0.05),GSH水平低而MDA、ROS水平高(P<0.05),GPX4、NRF2、HMGB1 蛋白表达高(P<0.05),Bax、LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ、p62 蛋白表达高而 Bcl-2 蛋白表达低(P<0.05);与模型组比较,含药血清组、激素组逆转以上指标变化(P<0.05).与模型组比较,模型+siNC+含药血清组细胞GPX4、NRF2、HMGB1蛋白表达低(P<0.05),Bax、LC3 Ⅱ/LC3、p62蛋白表达低而Bcl-2蛋白表达高(P<0.05);与模型+siNC+含药血清组比较,模型+siHMGB1+含药血清组GPX4、NRF2、HMGB1蛋白表达高(P<0.05),Bax、LC3 Ⅱ/LC3、p62蛋白表达高而Bcl-2蛋白表达低(P<0.05).结论:防己黄芪颗粒含药血清可能通过HMGB1-自噬-铁死亡信号通路抑制IgAN系膜细胞凋亡.
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