换一批狐、貉和水貂犬瘟热病毒受体SLAM的基因克隆及其真核表达
Molecular cloning and eukaryotic expression of Canine distemper virus receptor gene SLAM of fox, raccoon dog and mink
摘要信号淋巴激活分子(SLAM)为犬瘟热病毒(CDV)感染其宿主动物识别的细胞受体.本试验应用RT-PCR从狐狸、貉和水貂的外周血淋巴细胞中克隆到其相应SLAM基因.基因测序比较发现,狐狸、貉与同科的犬SLAM基因编码区长度均为1029 bp.核苷酸同源性高于98.6%;而水貂SLAM基因编码区长度为1020 bp,与以上三种动物遗传关系较远(核苷酸同源性<83.7%),但与海豹SLAM基因遗传关系较近(核苷酸同源性为91.4%).基于小同动物SLAM基因序列的系统进化树分析显示,犬、狐狸、貉、水貂和海豹在进化树上构成了以CDV为感染宿主的遗传分支.氨基酸序列比较显示,该5种动物SLAM分子上均存在一个长度为26个氨基酸的信号肽序列,且在空间结构上影响宿主--病毒特异性的8个关键氨基酸均完全保守.通过构建表达该狐狸、貉、水貂SLAM基因的三种真核表达质粒,分别转染CRFK细胞后,应用CDV强毒感染试验证实,CDV均能在三种转染细胞上产生明显的细胞病变效应(CPE),而未转染CRFK细胞对照无CPE产生,由此证实作为CDV细胞受体的狐、貉和水貂的SLAM,体外表达后能明显增强犬瘟热强毒株对非敏感细胞的感染能力.
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