换一批基于CRISPR/Cas9系统的人成神经瘤SK-N-SH细胞CAPNS1基因的靶向敲除
Targeting Knockout of CAPNS1 Gene in SK-N-SH Human Neuroblastoma Cells Based on CRISPR/Cas9 System
摘要利用CRISPR/Cas9技术靶向构建CAPNS1基因敲除人成神经瘤细胞SK-N-SH细胞系.在NCBI数据库查找人CAPNS1基因, 获得该基因CDS区, 根据CRISPR/Cas9敲除靶位点设计原则即g RNA设计原则, 设计3条sg RNAs, 以p GK1.1为载体, 构建人CAPNS1基因敲除载体, 并运用共转染的方法转染到SK-N-SH细胞, 构建CAPNS1基因敲除SK-N-SH细胞系.结果发现, 菌落PCR筛选均能扩增出100 bp大小的片段, 单克隆为阳性, DNA测序显示sg RNA序列正确插入质粒, 序列比对结果正确;质粒转染SK-N-SH细胞后, 制备单克隆, CruiserTMEnzyme酶切后疑似为阳性克隆, 进一步的单克隆测序结果显示CAPNS1基因敲除SK-N-SH细胞系构建成功;此外, 在CAPNS1-/-组, CAPNS1蛋白及calpain1和calpain2蛋白水平明显降低.以上结果表明CAPNS1基因敲除SK-N-SH细胞系构建成功.
更多相关知识
栏目名称
DOI
10.16605/j.cnki.1007-7847.2018.04.003
发布时间
2018-10-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
- 浏览55
- 被引1
- 下载1
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
