茶陵野生稻冷响应基因OrCrGHl的表达与克隆
Expression and Cloning of OrCrGHl,a Novel Cold-responsive Gene in Chaling Common Wild Rice
摘要为了发现新的水稻耐逆基因,采用水稻基因芯片分析了茶陵野生稻及籼型栽培稻培矮64S苗期全基因组在冷胁迫下的表达水平,从茶陵野生稻中筛选出一个强烈响应低温的耐冷候选基因,暂命名为OrCrGHl(Oryza rufipogon cold responsive glucan hydrolase-like).用实时定量PCR方法对其表达水平进行了进一步的分析,所得结果与基因芯片分析结果基本吻合.以茶陵野生稻为材料,用逆转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)方法获得了包含其完整开放阅读框(openreading frame,ORF)的cDNA克隆.根据其ORF序列进行预测,该基因编码一个包含558个氨基酸残基的糖基水解酶相似蛋白质,其理论分子质量为59.252 kD,pI为5.81.经蛋白质相似性比对,其编码蛋白与日本晴第7号染色体上的LOC4343492基因编码的蛋白质(XP_015647631.1,glucan endo-1,3-beta-glucosidase GⅡ isoform X2)的氨基酸序列完全一致,与籼稻 93-11 预测蛋白质(EEC82204.1,hypothetical protein OsI_26347)的相似性为99.28%.对其可能的启动子区域序列进行分析,发现了多个可能与逆境或逆境激素响应有关的顺式作用调控元件.以上结果提示,该基因为一新的野生稻耐冷候选基因,进一步的研究正在进行.
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