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液相色谱-串联质谱法检测干血点中的同型半胱氨酸

Determination of homocysteine in dried blood spots using liquid chromatography-tandem mass spectrometry

二维码有效期 120s

摘要建立了一种高通量液相色谱-串联质谱技术检测干血点（ DBS）中同型半胱氨酸（ homocycteine，Hcy）的方法。以 DBS为样本，homocystine-D8为同位素内标，二硫苏糖醇（ DTT ）为蛋白结合态 Hcy 的还原剂，使用含0.1％（ v／v）甲酸、0.05％（ v／v）三氟乙酸的乙腈溶液萃取。整个前处理过程使用自动移液平台及96孔板实现高通量自动化操作。处理后的样本经过 Phenomenex CN柱分离，使用多反应监测模式进行 LC-MS／MS 分析。结果表明：Hcy的检出限为0.12μmol／L（ S／N=3），定量限为0.46μmol／L（ S／N=10）。Hcy 在1.16~148.00μmol／L 范围内线性关系良好，R2=0.994。Hcy 的平均回收率为（103.0±4.97）％~（112.0±2.13）％，日内相对标准偏差（ RSD）为1.9％~4.6％，日间 RSD为1.5％~7.1％。DBS 样本在不同温度（-4、-20、22和37℃）下储存不同时间（0、1、2、3、4、5、6、14天）后的稳定性试验显示样本总体 RSD﹤15％，经前处理后的样本在48 h内的稳定性试验显示样本总体 RSD﹤5％。该方法与传统生化分析方法的相关性好（ R2=0.9818，n=47）。