液相色谱-串联质谱法测定百日咳和百白破疫苗中百日咳杆菌气管细胞毒素

Determination of tracheal cytotoxin in pertussis and diphtheria tetanus acellular pertussis vaccines using liquid chromatography-tandem mass spectrometry

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摘要百日咳杆菌气管细胞毒素(TCT)是一种引起百日咳及百日咳相关疫苗不良反应的毒性糖肽.尽管各国药典均规定了百日咳疫苗产品中TCT的含量限度,但均没有推荐TCT的含量测定方法.该研究发展了一种液相色谱-串联质谱法用于TCT的含量测定.实验优化了包括色谱柱类型和流动相组成在内的TCT色谱条件.虽然TCT在反相色谱模式和亲水作用色谱(HILIC)模式下均具有较好的保留,但HILIC模式与蛋白质沉淀的前处理方法兼容性更好,因此采用HILIC模式分离TCT.优化所得的方法具有较宽的线性范围(5.76～369 ng/L),良好的重复性(峰面积的相对标准偏差不大于3.9％),各种基质中均有较好的回收率(96.4％～102.5％),且定量限是药典要求的TCT最高限量的1/1279.将本方法用于共纯化百日咳疫苗、组分百日咳疫苗、共纯化无细胞百白破疫苗和组分无细胞百白破疫苗中TCT的检测,所有产品均未检出TCT,表明被检样品具有较好的工艺条件可避免TCT在产品中的残留.