换一批牛乳过敏原β-乳球蛋白分离纯化方法优化及IgG结合能力分析
Optimization of a method for the isolation and purification of bovine milk allergen β-lactoglobulin and analysis of its IgG binding capacity
摘要目的 优化分离纯化方法,获得高纯度、高得率且具有良好IgG结合能力的 β-乳球蛋白(β-lactoglobulin,β-Lg).方法 以超速离心脱脂、等电点沉淀、硫酸铵沉淀为前处理方法,通过Sephadex G-75凝胶柱层析、DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换柱层析纯化β-Lg,并对纯化条件进行优化,结合十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)与液相色谱-串联质谱法(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)对 β-Lg进行鉴定,采用蛋白质印迹法(Western blot)对其IgG结合能力进行验证.结果 凝胶层析最佳洗脱条件为0.02 mol/L pH 6.8 Tris-HCl+0.15 mol/L NaCl,流速0.4 mL/min;阴离子交换层析最佳洗脱条件为0.05 mol/L pH 6.5 Tris-HCl+0～0.5 mol/L NaCl,流速0.5 mL/min;结合SDS-PAGE与LC-MS/MS鉴定,该条件下获得的终产物为 β-Lg;该方法获得的 β-Lg得率为54.89％,纯度为100％(SDS-PAGE),且具有良好的IgG结合能力.结论 本研究建立了一种简单、可重复的β-Lg分离纯化方法,在获得高纯度β-Lg的同时保持良好的IgG结合能力,为后续牛乳过敏及脱敏研究提供技术支撑.
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