基于RPA-CRISPR-Cas12a和聚噻吩显色技术快速检测转基因植物外源基因CP4-EPSPS

Rapid detection of transgenic plant exogenous CP4-EPSPS gene based on RPA-CRISPR-Cas12a and polythiophene chromogenic technology

二维码有效期 120s

摘要目的开发基于重组酶恒温扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)结合簇状规则间隔短链重复序列及相关蛋白(clustered regularly interspaced short palindromic repeats-associated 12a protein,CRISPR-Cas12a)和聚噻吩显色技术快速检测转基因植物外源基因CP4-EPSPS的方法.方法利用Cas12a附属切割机制进行精准识别RPA产物中的靶标,结合阳离子水溶性共轭聚噻吩(cationic water-soluble conjugated polythiophene,PMNT)与体系中单链DNA(single stranded DNA,ssDNA)的颜色变化检测转基因产品中耐除草剂草甘膦CP4-EPSPS抗性基因.结果 167 bp的RPA引物进行扩增时,扩增体系为20μL时条带最清晰;ssDNA的碱基数为15,Cas12a酶的浓度为0.28 U为最优组合.进行RPA-CRISPR-Cas12a反应后,加入PMNT溶液,裸眼观察是溶液从红色变为黄色,紫外下照射下则颜色为橘红色变为橙黄色,检出限为45拷贝.结论构建了一种基于PMNT颜色变化进行转基因产品的CRISPR-Cas12a的检测方法,30 min内完成整个检测过程,仅需要恒温加热可实现快速灵敏、可视化的检测.

作者刘华 ^[1] 曾海娟 ^[1] 唐雪明 ^[2] 徐丹红 ^[3] 雒嘉伟 ^[4] 王金斌 ^[5] 学术成果认领

作者单位上海农业科学院生物技术研究所, 上海 201106;上海市农业遗传育种重点实验室, 上海 201106 ^[1] 上海交通大学农业与生物学院, 上海 200240 ^[2] 上海海洋大学食品学院, 上海 201306 ^[3] 兰州理工大学生命科学与工程学院, 兰州 730050 ^[4] 上海农业科学院生物技术研究所, 上海 201106 ^[5]

关键词重组酶恒温扩增簇状规则间隔短链重复序列阳离子水溶性共轭聚噻吩现场速测转基因产品

栏目名称 食品分析与检测

发布时间 2023-02-06

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