换一批基于荧光及可视化逆转录环介导等温扩增检测食源性甲型肝炎病毒的方法开发
Development of a method for the detection of foodborne hepatitis A virus based on fluorescence and visualization loop-mediated isothermal amplification
摘要目的 基于荧光及可视化逆转录环介导等温扩增(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)开发食源性甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)的检测方法.方法 从美国国家生物技术信息中心中选取世界范围内具有代表性的HAV基因信息,设计LAMP引物,开发了一种荧光曲线RT-LAMP和可视化RT-LAMP检测方法.以HAV质粒为模板,评估方法的扩增效率、灵敏度和稳健性,并与实时荧光逆转录-聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)进行检出限及实际样品验证比较.结果 荧光及可视化LAMP方法检测灵敏度为 10.76 copies/μL,与实时荧光RT-PCR一致;在 95%置信水平下经概率回归分析检出限(limit of detection,LOD95%),荧光曲线 RT-LAMP 的 LOD95%为 17.46 copies/μL(7.00～511.29 copies/μL,95%),实时荧光RT-PCR的LOD95%为79.30 copies/μL(24.68～3208.71 copies/μL,95%);稳健性分析表明方法稳定;与实时荧光RT-PCR比较,检测30份实际样品的验证比对符合率为100%.结论 该检测方法经济便捷,可通过肉眼直接观察结果,适合于食品安全现场监测,具有很好的应用前景.
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关键词
环介导等温扩增可视化甲型肝炎病毒快速检测loop-mediated isothermal amplificationvisualizationhepatitis A virusrapid detection
发布时间
2023-10-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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