换一批
换一批水产品中哈维氏弧菌等温快速检测方法优化及比较
Optimization and comparison of isothermal rapid detection methods for Vibrio harveyi in aquatic products
摘要目的 基于核酸等温扩增技术,建立荧光法、可视化环介导恒温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)和重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)快速检测哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)的分析方法,并对方法进行优化和比较.方法 选择哈维氏弧菌toxR基因为特异靶标序列,分别设计了 2 组LAMP引物、3 组RPA引物,对方法进行筛选.优化建立了荧光法LAMP、可视化LAMP、普通RPA 3 种等温扩增方法,对 3 种方法的特异性和灵敏度进行比较,并用模拟污染样本验证检测实际样品的灵敏度.结果 基于快速提取的哈维氏弧菌基因组DNA,本研究所建立的荧光法LAMP、可视化LAMP、普通RPA 3 种等温扩增方法均具有良好的特异性,与同属及近属的细菌没有交叉反应.3 种方法的灵敏度分别为5.27 fg/μL(1.99 fg/μL～0.93 pg/μL,95%置信区间)、0.11 ng/μL、1.07 pg/μL;荧光LAMP和普通RPA对模拟污染样本的灵敏度分别为 7 CFU/mL和 97 CFU/mL.结论 本研究建立优化的 3 种等温快速检测方法结果准确、操作简单,扩增效率和灵敏度优于文献报道的同类方法,提高了哈维氏弧菌现场快速检测水平.
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关键词
哈维氏弧菌荧光法可视化环介导等温扩增技术重组酶聚合酶扩增Vibrio harveyifluorescencevisual loop-mediated isothermal amplificationrecombinase polymerase amplification
栏目名称
本期专题:食品安全快速检测技术
发布时间
2023-12-08
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