换一批基于纳米抗体的可再生免疫亲和柱结合高效液相色谱-串联质谱法测定玉米中的黄曲霉毒素B1
Determination of aflatoxin B1 in maize by high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry coupled with a renewable immunoaffinity column based on nanobodies
摘要目的 研究黄曲霉毒素 B1(aflatoxin B1,AFB1)纳米抗体的表达产量的影响因素,开发具有可再生性的AFB1 免疫亲和柱,构建免疫亲和处理-高效液相色谱-串联质谱法(high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,HPLC-MS/MS)测定玉米中AFB1污染的分析方法.方法 研究诱导温度、诱导时间和诱导剂浓度等对AFB1纳米抗体表达量的影响,比对验证AFB1纳米抗体可再生免疫亲和柱的耐受性和可再生使用次数.使用70%甲醇水溶液提取玉米样品中AFB1,提取液通过免疫亲和柱净化富集后进行HPLC-MS/MS检测,最后进行方法学验证并应用到实际样品检测.结果 诱导AFB1纳米抗体表达的最优条件分别为诱导温度 16℃、诱导剂异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷浓度0.5 mmol/L、诱导时间14 h,在最优条件下产量可达7.8 mg/L.AFB1纳米抗体具有良好灵敏度、亲和性、特异性和甲醇耐受性,制备的AFB1免疫亲和柱具有极好的可再生性,重复使用150次以上,对AFB1回收率仍可达80%以上.同时,建立的免疫亲和处理-HPLC-MS/MS,在0.1～100.0 μg/L范围内呈现良好的线性关系,检出限为0.014 μg/L,定量限为0.047 μg/L.在3个不同加标浓度下,回收率在92.0%～104.1%,变异系数小于3.9%.结论 本研究开发的AFB1纳米抗体免疫亲和柱表现出优秀的再生性和高特异性,节约了检测成本,建立的免疫亲和处理-HPLC-MS/MS检测方法操作简便、回收率高、结果准确,适用于实际玉米样品中AFB1的含量测定.
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黄曲霉毒素B1纳米抗体可再生免疫亲和柱高效液相色谱-串联质谱法玉米aflatoxin B1nanobodyrenewable immunoaffinity columnshigh performance liquid chromatography-tandem mass spectrometrymaize
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2024-03-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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