换一批重组牛乳过敏原β-乳球蛋白的可溶性表达及其特性分析
Soluble expression and characteristic analysis of recombinant bovine milk allergen β-lactoglobulin
摘要目的 实现β-乳球蛋白(β-lactoglobulin,BLG)的可溶性表达,并比较重组BLG和天然BLG在结构和免疫原性两个方面的差异性.方法 将pET-30a-BLG重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG)进行体外诱导表达,并对表达条件进行优化,采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺电泳方法分析重组蛋白的可溶性.利用荧光光谱和圆二色谱比较重组BLG 空间结构变化,同时采用竞争抑制酶联免疫吸附实验评价重组 BLG 致敏性能力.结果 在 Tris-HCl 溶液体系中重组BLG的可溶性表达可达到 50%以上,可溶性表达的最优条件为:在Tris-HCl溶液体系中,诱导温度为 37℃,IPTG终浓度 1.0 mmol/L,诱导 4 h.重组BLG表面疏水性下降,可溶性重组BLG的α-螺旋结构减少,经除盐处理后致敏性下降,包涵体重组BLG无规则卷曲结构减少、致敏性上升.结论 本研究成功从上清液中纯化得到可溶性重组BLG,且可溶性表达获得的BLG空间结构更接近天然蛋白.
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2024-03-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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