换一批叠氮丙啶-实时荧光聚合酶链式反应-高通量测序技术鉴定冷链食品中多种病原菌
Identification of multiple pathogens in cold chain foods by propidium monoazide-real time fluorescent polymerase chain reaction-high throughput sequencing technology
摘要目的 应用叠氮丙啶-实时荧光聚合酶链式反应-高通量测序技术鉴定冷链食品中多种病原菌,构建病原菌分子进化树.方法 以冷链食品中的沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、蜡样芽胞杆菌、副溶血性弧菌、单核细胞增生李斯特氏菌 5种病原菌作为研究对象,应用叠氮丙啶-实时荧光聚合酶链式反应技术作为冷链食品中病原菌检测初筛手段,应用微生物培养法以及生化鉴定仪器法进行方法比对与结果验证,运用高通量测序以及分子进化树构建作为冷链食品中所分离病原菌的种属地位确证方法.结果 叠氮丙啶-实时荧光聚合酶链式反应技术成功扩增了冷链食品中生活状态病原菌的特征性核酸片段,排除了死亡细菌以及阴性对照菌的干扰,病原菌检出限可达到 1×103 CFU/mL,一次反应可检测 42 份试样,可以在 18 h内完成检测工作.在冷链食品中病原菌抽样检测调查中,随机采集的 751 份冷链食品,共检出 62 株病原菌,病原菌总体检出率为 8.3％(62/751).通过后续的 16S rRNA测序以及葡萄球菌属、弧菌属以及李斯特菌属分子进化树的构建,成功溯源了金黄色葡萄球菌的污染来源并完成病原菌种属定位.结论 本方法特异性好、灵敏度高、检测通量高,为冷链食品及相关食品中病原菌的精确检测与溯源分析提供新的思路与方法.
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关键词
叠氮丙啶-实时荧光聚合酶链式反应技术高通量测序分子进化树冷链食品病原菌propidium monoazide-real time fluorescent polymerase chain reaction technologyhigh throughput sequencingmolecular phylogenetic treecold chain foodpathogens
栏目名称
DOI
10.19812/j.cnki.jfsq11-5956/ts.20230922001
发布时间
2024-04-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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