换一批鱼类产品中嗜水气单胞菌重组酶聚合酶扩增结合CRISPR/Cas12a快速检测及耐药性分析
Rapid detection and drug resistance analysis of Aeromonas hydrophila recombinase polymerase amplification combined with CRISPR/Cas12a in fish products
摘要目的 建立重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)结合簇状规则间隔短链重复序列及其相关蛋白(clustered regularly interspaced short palindromic repeats-associated protein,CRISPR-Cas)新方法,检测鱼类产品中嗜水气单胞菌,并分析其耐药性.方法 采用基于最新的 CRISPR 基因编辑技术建立RPA结合CRISPR/Cas12a新方法,快速检测嗜水气单胞菌,同时采用环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法比对两种方法的检出率.筛查嗜水气单胞菌分离株的耐药性,采用纸片扩散法测定耐药表型,采用荧光染料(SYBR green,SYBG)实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,qPCR)测定耐药基因,分析耐药表型与耐药基因结果的一致性.结果 在 74 例鱼类样品中,基于RPA-CRISPR/Cas12a和LAMP同时检测出 6 例嗜水气单胞菌.分析耐药性测试结果发现,分离株对 5 大类 10 种抗生素的耐药情况差异较大,耐药表型与耐药基因结果一致性较高.结论 所建立的RPA-CRISPR/Cas12a 方法适用于嗜水气单胞菌快速检测.而细菌耐药性的产生机制比较复杂,耐药表型的产生在一定程度上受耐药基因调控.研究结果为水产品中嗜水气单胞菌快速检测和耐药性筛查提供新思路和方法.
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关键词
嗜水气单胞菌重组酶聚合酶扩增簇状规则间隔短链重复序列及其相关蛋白环介导等温扩增实时荧光定量聚合酶链式反应耐药表型耐药基因Aeromonas hydrophilarecombinase polymerase amplificationclustered regularly interspaced short palindromic repeats-associated proteiloop-mediated isothermal amplificationreal-time fluorescence quantitative polymerase chain reactiondrug-resistant
栏目名称
DOI
10.19812/j.cnki.jfsq11-5956/ts.20240223003
发布时间
2024-07-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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