解淀粉芽孢杆菌BA-2原生质体的制备及纤维素酶高产突变菌株筛选

Protoplast mutagenesis was used to select and breed mutant strains with high yield of cellulase

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摘要目的确认解淀粉芽孢杆菌BA-2(Bacillus amyloliquefaciens BA-2)原生质体制备的最佳条件,并对其菌株进行复合诱变筛选获得耐高温性状产纤维素酶菌株.方法通过探究菌龄、溶菌酶浓度、酶解时间、酶解温度、渗透压稳定剂的pH、再生培养基类型和培养方式等考察原生质体制备与再生条件的影响因素,确定其最优条件.并用紫外线对原生质体进行诱变,获得的再生突变菌株作为出发菌株进行后续诱变处理,采用化学诱变剂硫酸二乙酯处理菌株,设置培养温度梯度筛选菌株.结果解淀粉芽孢杆菌BA-2原生质体制备的最优条件为菌龄8 h,溶菌酶质量浓度1.5mg/mL,酶解时间65 min,酶解温度37℃,渗透压稳定剂pH 6.5.在此条件下,解淀粉芽孢杆菌原生质体的形成率为98.85％±0.26％,再生率为57.39％±0.76％.经过复合诱变获得突变菌株BA-DES4在培养温度55℃下酶活达到(76.58±1.19)U/mL,滤纸酶活较出发菌株BA-2提高24.5％.结论本研究获得了解淀粉芽孢杆菌BA-2原生质体制备的最佳条件,并通过复合诱变筛选获得耐高温性状产纤维素酶菌株BA-DES4,该菌株稳定性强、适应性好,具有开发成为工业化生产纤维素酶的微生物潜力,突变菌株产酶条件有待进一步研究,以满足于工业化生产的需求.