高效液相色谱法检测牛奶中免疫球蛋白G含量
Determination of immunoglobulin G content in milk by high performance liquid chromatography
摘要目的 建立高效液相色谱法检测牛奶中免疫球蛋白 G含量的分析方法.方法 样品加pH为 7.0 的磷酸盐缓冲液提取,于 12000 r/min下离心 10 min,经玻璃纤维滤纸过滤,取滤液用 1 mL规格的Protein G亲和柱净化,用 4 mL pH为 2.5 的洗脱液定容,过滤膜,以BEH C4 为色谱柱,柱温 65℃,以三氟乙酸水溶液、三氟乙酸乙腈溶液为流动相,流速设置为1.5 mL/min,进样量30 μL,在波长为280 nm下用高效液相色谱仪进行测定.结果 免疫球蛋白G质量浓度在 5.0~200.0 mg/L范围内线性关系良好,相关系数r2 大于 0.999,方法定量限(limits of quantification,LOQs)为 10.0 mg/kg.当加标浓度在 100.0~400.0 mg/kg范围内,加标回收率在 97.2%~103.6%之间,相对标准偏差在 2.5%~5.9%之间.结论 依据化学分析方法验证指南(GB/T 27417-2017《合格评定 化学分析方法确认和验证指南》),确认所建立的分析方法具有足够的准确性和重复性.该方法可为准确检测牛奶中免疫球蛋白G含量提供技术支持.
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