太平洋牡蛎不同温度处理下转录组分析与类B3GALT1基因的克隆及表达

Transcriptome analysis of different temperature stress in Crassostrea gigas and cloning and expression of B3GALT1-like

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摘要目的探究不同温度处理下太平洋牡蛎中诺如病毒结合受体合成通路上响应的基因,筛选后进行克隆和表达规律的研究.方法对牡蛎分别进行高温(25℃)及低温(5℃)处理,取其鳃和消化腺两种组织,提取RNA后进行转录组测序与分析.选取诺如病毒结合受体合成通路上规律性响应温度处理的基因作为目标,对目标基因进行克隆、原核表达与免疫印迹鉴定.通过实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)分析该基因的组织表达和季节表达规律.结果类β1,3 半乳糖转移酶 1(B3GALT1)基因(GenBank LOC117683256)在鳃组织低温组的多个取样点均出现显著上调.扩增得到该基因1089 bp 的编码区(coding sequence,CDS).在 25℃、异丙基-D-硫代半乳糖苷(isopropyl beta-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导 8 h后,出现大小约为 84.9 kDa的蛋白条带,该条带与抗MBP标签抗体、抗人B3GALT1 抗体均能发生特异性结合.类B3GALT1 基因在鳃组织中大量表达,且低温时的表达量显著高于高温(P<0.01).结论太平洋牡蛎类B3GALT1 基因的表达量受温度影响,表达的蛋白与人类β1,3 半乳糖基转移酶具有相似的免疫原性;类B3GALT1基因的组织表达和季节表达规律在一定程度上与诺如病毒爆发的季节性相符合.本研究为深入探索牡蛎季节性富集诺如病毒分子机制提供基础.