多重聚合酶链式反应-毛细管电泳技术检测5种食源性致病菌
Detection of 5 kinds of foodborne pathogens by multiplex polymerase chain reaction and capillary electrophoresis technology
摘要目的 利用多重聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)-毛细管电泳技术,构建一种快速检测沙门氏菌、大肠埃希氏菌 O157:H7、单核细胞增生李斯特氏菌、金黄色葡萄球菌和副溶血性弧菌的方法.方法 针对 5 种食源性致病菌,选择保守性较好的致病基因设计特异性多重PCR引物,利用毛细管电泳成像分析多重PCR产物.通过对PCR及电泳条件进行优化,建立 5 种食源性致病菌的多重PCR-毛细管电泳检测方法,并对其特异性、灵敏度进行研究.结果 5 对引物特异性良好,均未出现非特异性扩增,多重PCR最佳引物浓度为0.2 μmol/L,最佳退火温度为56.0℃,毛细管电泳最佳分离模式为AM900,灵敏度较高,检测灵敏度可达到 5×10-3 ng/μL.结论 本研究建立的多重PCR-毛细管电泳方法用于检测 5 种食源性致病菌,操作简便、特异性和灵敏度高,在食源性致病菌检验中具有较好的实用价值.
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