基于改进的预扩增实时荧光定量聚合酶链式反应法检验虹鳟源性成分
Detection of Oncorhynchus mykiss source components based on improved pre-amplification real-time quantitative polymerase chain reaction method
摘要目的 建立改进的预扩增实时荧光定量聚合酶链式反应法(quantitative real-time polymerase chain reaction,qPCR)法检验虹鳟源性成分的方法.方法 基于对现行标准中虹鳟qPCR方法进行验证和改进提高,建立改进的预扩增qPCR方法,并对两种qPCR方法进行比较.结果 经验证,在采用标准中qPCR方法对虹鳟的近种鱼种银鲑、大西洋鲑等鱼种进行特异性验证时有交叉反应,基于设置预扩增反应步骤的改进qPCR方法特异性良好,对于银鲑、大西洋鲑等近种鱼种未出现交叉扩增.qPCR和预扩增qPCR方法的扩增效率分别为 90.25%、104.91%,最低检出限分别为 2.99×10-3 ng/μL(0.83~8.87 pg/μL,95%置信区间)和 1.50×10-4 ng/μL(0.09~0.27 pg/μL,95%置信区间).结论 所改进的虹鳟源性成分预扩增qPCR方法具有高特异性、高灵敏度,适用于食品样品中虹鳟源性成分的真实性和掺假检验.
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