摘要目的 探讨老鹰茶提取物中黄酮类成分(Hawk tea flavonoids,HTF)的体外抗氧化效果和对口腔鳞癌细胞株HN4程序性凋亡诱导的影响机制.方法 本研究采用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)对 HTF 进行分析.采用 1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazy l,DPPH)自由基、2,2'-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐[2,2'-azino-bis-(3-ethylbenz-thiazoline-6-sulfonic acid radical ion),ABTS]阳离子自由基、羟基自由基、超氧阴离子自由基清除实验对HTF的体外抗氧化效果进行检测.本研究还采用四甲基偶氮唑蓝[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT]比色法评估HTF作用后癌细胞的活性,并运用实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)和Western Blot技术分析相关基因表达的变化.结果 成分分析显示HTF主要包括芦丁、儿茶素没食子酸、槲皮苷、槲皮素、山奈酚、β-鼠李素6种黄酮化合物.在0～150 mg/mL质量浓度范围内,HTF对DPPH自由基、ABTS阳离子自由基、羟基自由基及超氧阴离子自由基具有很好的清除效果,同时能选择性抑制HN4癌细胞的增殖,而对正常口腔角质形成细胞的生长无明显影响.基因表达分析表明,经HTF处理的癌细胞中促凋亡因子[包括半胱天冬酶(cysteine-dependent aspartate-specific proteases,Caspase)-3、Caspase-8、Caspase-9、B 细胞淋巴瘤-2(B-cell lymphoma 2,Bcl-2)相关 X 蛋白(Bcl-2-associated X protein,Bax)、凋亡相关因子(factor associated suicide,Fas)及其配体凋亡相关因子配体(fas ligand,FasL)]的mRNA水平显著升高,而抗凋亡蛋白[Bcl-2、Bcl-2相关X蛋白长亚型(B-cell lymphoma-extra large,Bcl-xL)、细胞型凋亡抑制蛋白-1(cellular inhibitor of apoptosis protein-1,cIAP-1)和 cIAP-2]的表达则受到抑制.同时,Caspase-3、Caspase-8 和 Caspase-9的蛋白表达也得到上调.这种剂量依赖性效应在150 mg/mL处理组最为显著,此时促凋亡基因表达达到峰值,而抗凋亡基因表达降至最低水平.结论 HTF具有良好的体外抗氧化效果,且可能通过激活Caspase级联反应,调控Bcl-2家族蛋白的表达平衡,从而在体外实验中诱导HN4癌细胞发生程序性凋亡死亡.