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散装即食食品中5种食源性致病菌高分辨率熔解曲线检测方法的建立

Establishment of high-resolution melting analysis for the detection of 5 kinds of foodborne pathogens in bulk ready-to-eat food

摘要目的 建立快速高效检测鉴定散装即食食品中单增李斯特菌、沙门氏菌、副溶血性弧菌、金黄色葡萄球菌以及蜡样芽孢杆菌的方法.方法 分别以上述5种菌的hlyA、invA、tlh、nuc和nheA特异性基因作为靶基因,构建多重聚合酶链式反应-高分辨率熔解曲线(polymerase chain reaction-high-resolution melt assay,PCR-HRM)检测体系,并评价其特异性、灵敏度以及实际样品中快速检测的可行性.结果 本方法可在同一体系中特异性扩增5种致病菌DNA并生成熔解曲线,不同菌株溶解曲线峰值的差值大于1.0 ℃,最低检出限达到0.02 ng/μL,可通过熔解峰温度实现对目标菌株的快速准确筛查.对4类散装即食食品样品进行检测,检出结果与国家标准培养法完全一致,但检测时间大幅缩短,提升了检测效率.结论 该研究建立的多重PCR-HRM检测方法实现了同一体系下5种致病菌的快速准确筛查,展现出良好的特异性和灵敏性,可为散装食品安全监管提供技术支持.

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