龟甲酶解肽制备工艺优化及其抗氧化活性研究
Optimization of preparation process and study on antioxidant activity of turtle shell enzymatic peptides
摘要目的 优化龟甲仿生酶解肽制备工艺,并筛选龟甲酶解肽抗氧化活性组分.方法 本研究采用响应面法设计实验,以胃蛋白酶质量分数、酶解时间,胰蛋白酶质量分数、酶解时间为影响因素,水解度和肽含量综合评分为响应值,优化龟甲的酶解肽工艺.通过膜分离技术分别将龟甲、醋龟甲酶解肽分为5个不同分子量组分,并利用体外抗氧化实验筛选龟甲酶解肽最佳组分.结果 龟甲酶解肽工艺最佳参数为:胃蛋白酶质量分数1.00%、胃蛋白酶酶解时间2.0h、胰蛋白酶质量分数2.0%、胰蛋白酶酶解时间3.0h.在此工艺下,龟甲、醋龟甲各酶解肽组分均表现出抗氧化活性,其中分子量(molecular weight,Mw)<1 kDa组分活性最佳,且醋龟甲活性强于龟甲.在质量浓度为2 mg/mL时,醋龟甲酶解肽Mw<1 kDa组分对羟基自由基、2,2'-联氮-双-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)阳离子自由基、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基清除率分别为56.52%、72.59%、61.33%,对Fe3+的总还原力为0.33.细胞实验显示,不同质量浓度的龟甲与醋龟甲酶解肽Mw<1 kDa组分(12.50~200.00 μg/mL)均可促进成骨细胞MC3T3-E1的增殖,显著提高细胞内超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性,并降低丙二醛含量,表现出良好的抗氧化性能.结论 本研究优化了龟甲酶解肽的制备工艺,为龟甲酶解肽的深入研究及醋龟甲的进一步开发与利用提供了参考.
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