换一批产毒碳黑曲霉菌双重荧光定量聚合酶链式反应检测技术的建立与应用
Establishment and application of dual fluorescence quantitative polymerase chain reaction for the detection of toxin-producing Aspergillus carbonarius
摘要目的 建立检测产毒碳黑曲霉菌的聚酮合酶(polyketide synthases,PKS)基因和非核糖体肽合成酶(nonribosomal peptide synthetase,NRPS)基因的双重荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)方法.方法 以产毒碳黑曲霉菌PKS和NRPS相对保守基因片段作为靶点,分别设计并筛选出特异性引物和探针对,在优化双重荧光定量PCR反应条件后,建立双重荧光PCR反应标准曲线,随后验证该方法的特异性、灵敏度和重复性,最后用该方法对 80 份实际样品和人工侵染不同浓度产毒碳黑曲霉菌孢子的玉米、花生及大豆样品进行检测.结果 特异性实验结果表明,该双重荧光PCR对黄曲霉、寄生曲霉等常见产毒真菌均无非特异性反应,仅特异性扩增产毒碳黑曲霉菌的PKS基因和NRPS基因.灵敏度结果显示,该方法检测下限可达 1×102 copies/μL.方法重复性佳,批内和批间变异系数均小于 1%.模拟样本检测结果表明,双重荧光定量PCR在 3 种人工侵染样品中最低均可检出 1×103 spores/mL的孢子.结论 本研究建立的方法具有较高的灵敏性和准确性,能够为产赭曲霉毒素A的产毒碳黑曲霉菌的早期监测和防控提供技术支撑.
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关键词
产毒碳黑曲霉菌双重荧光定量聚合酶链式反应快速检测toxin-producing Aspergillus carbonariusdual fluorescence quantitative polymerase chain reactionrapid detection
栏目名称
DOI
10.19812/j.cnki.jfsq11-5956/ts.20250919005
发布时间
2026-01-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
杭州海关科研项目（2024HZ04）
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