换一批玉米种子不同部位基因组提取效率对CRISPR/Cas12a检测体系的影响
Effects of genomic extraction efficiency from different parts of maize seeds on CRISPR/Cas12a-based detection system
摘要目的 探究玉米种子不同部位在基因组提取和核酸检测中的表现差异,明确最优选择和对成簇规律间隔短回文重复序列及相关蛋白 12a(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/associated protein 12a,CRISPR/Cas12a)检测体系结果的影响.方法 本研究比较了玉米种子胚、胚乳和全籽粒的基因组提取效率;通过常规聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)级联CRISPR/Cas12a系统,对各部位提取产物进行靶标扩增和识别,评估所提取基因组对后续核酸检测的影响;通过对比DNA提取效率、扩增效果和荧光信号强度,验证各部位样本在检测中的适应性.结果 玉米种子不同组织部位的DNA提取效率存在差异,胚部基因组含量最高、全籽粒次之,胚乳相对较低,符合玉米种子生物学结构特征;各部位基因组均能成功扩增,级联CRISPR/Cas12a系统检测产生明确阳性信号;本研究构建的方法定性检出限为0.1 wt%,符合大多数国家和地区对转基因成分的检测要求.结论 玉米种子不同部位基因组提取效率存在差异,但均具备良好的核酸扩增和CRISPR/Cas12a检测适应性,在实际检测中全籽粒取样即可满足检测灵敏度且操作更便捷.本研究开发的方法无需大型仪器设备,能够满足对转基因玉米种子现场检测的需求,具备转基因食品安全筛查的应用价值.
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关键词
转基因玉米种子基因组提取核酸检测成簇规律间隔短回文重复序列及相关蛋白12agenetically modified maizegenomic extractionnucleic acid testingclustered regularly interspaced short palindromic repeats/associated protein 12a
栏目名称
DOI
10.19812/j.cnki.jfsq11-5956/ts.20250729003
发布时间
2026-01-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
农业生物育种重大专项（2022ZD0401901）
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