换一批膜法改进十六烷基三甲基溴化铵法结合实时荧光聚合酶链式反应检测高色素食品DNA
Detection of DNA in highly pigmented foods by membrane-based improved cetyltrimethylammonium bromide combined with real-time fluorescence polymerase chain reaction
摘要目的 建立膜法改进十六烷基三甲基溴化铵(cetyltrimethylammonium bromide,CTAB)法结合实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测高色素食品DNA的方法.方法 以黑芝麻、茶籽粕和菜籽粕为样本,采用 0.7 μm 玻璃纤维膜结合 70%乙醇淋洗液及三羟甲基氨基甲烷-乙二胺四乙酸[tris(hydroxymethyl)aminomethane ethylenediaminetetraacetic acid,TE]缓冲液洗脱 3 次的优化方案.通过滤膜特异性吸附和选择透过性去除色素,对比传统CTAB法与膜法改进CTAB法的提取效果.利用实时荧光PCR技术检测内源基因,评估DNA纯度和扩增效率.结果 改进方法获得的DNA脱色效果显著优于传统CTAB法,3种样本均成功检测到内源基因,DNA质量浓度均在100 ng/μL以上,循环阈值(cycle threshold,Ct)在20～25之间,而传统CTAB法因色素残留导致实时荧光PCR扩增失败.结论 膜法改进CTAB法通过简化纯化步骤、提升脱色效率,显著提高了高色素食品的DNA提取及检测成功率,为食品安全检测提供了高效可靠的技术支持.
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关键词
玻璃纤维膜核酸纯化脱色实时荧光聚合酶链式反应高色素食品glass fiber membranenucleic acid purificationdecolorizationreal-time fluorescence polymerase chain reactionhighly pigmented foods
栏目名称
DOI
10.19812/j.cnki.jfsq11-5956/ts.20250830001
发布时间
2026-01-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
海关总署科研项目（2024HK015）
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