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实时荧光定量聚合酶链式反应法快速鉴别薄荷真实性

Rapid identification of the authenticity of Mentha by real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction

摘要目的 构建实时荧光定量聚合酶链式反应法快速鉴别药食同源物种薄荷真实性的方法.方法 基于荧光探针技术(TaqMan probe technology,TaqMan),针对叶绿体 DNA 的核糖体蛋白 L16 编码基因(ribosomal protein L16,rpl16)内含子区域的保守区域,设计上游引物、下游引物和探针,特异性识别靶序列上的 3 个独立区域.建立 TaqMan 反应体系实现了对薄荷及其同源性植物的快速准确鉴别.结果 该方法特异性良好,薄荷出现扩增,薄荷常见伪品均无扩增;在灵敏度方面,在较广范围内(0.01~10000.00 fg/μL),循环阈(cycle threshold,Ct)值与模板浓度对数呈线性关系(r2=0.9999),薄荷质粒DNA的绝对检出限为 0.01 fg/μL,薄荷真实样品含量检出限可达 0.1%(质量分数);稳定性检测结果显示,所有引物阴性稳定性良好,没有出现非特异性扩增的情况.结论 该方法具有高特异性、灵敏度和稳定性,能将薄荷及其伪品进行有效区分.

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