络合提取/肝素亲和柱净化-高效液相色谱法测定含水解蛋白配方食品中的乳铁蛋白
Determination of lactoferrin in hydrolyzed protein formula foods by complexation extraction/heparin affinity column purification-high performance liquid chromatography
摘要目的 建立一种络合提取/肝素亲和柱净化-高效液相色谱法测定氨基酸配方及蛋白水解配方等特殊配方食品中乳铁蛋白含量的方法.方法 样品加络合磷酸盐缓冲液溶解提取,肝素亲和柱净化;采用 C4的 300 ? 蛋白分析色谱柱分离,流动相为乙腈-三氟乙酸溶液,梯度洗脱,高效液相色谱二极管阵列检测器测定,外标法定量.结果 乳铁蛋白峰型良好,与杂质基线分离,在 2~200 μg/mL 范围内线性关系良好(r2>0.999),方法检出限和定量限分别为 2 mg/100 g、6 mg/100 g;在低、中、高 3 个加标浓度水平下,平均回收率范围为 92.0%~96.2%,相对标准偏差为 2.5%~3.7%.结论 该方法准确可靠、重复性和稳定性良好,适用于氨基酸配方及蛋白水解配方等特殊配方食品的检测,解决了国家标准方法不适用于检测氨基酸配方及深度水解蛋白乳粉等特殊配方食品中乳铁蛋白的问题.
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