摘要目的 研究副溶血性弧菌新型外膜蛋白 5'-核苷酸酶(5'-nucleotidase,5'-NT)的免疫原性.方法 采用生物信息学方法分析 5'-NT 的序列保守性、结构及抗原表位;通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)克隆该基因,构建pET-28a(+)与5'-NT基因nutA的重组质粒并在大肠杆菌中诱导表达,经镍-次氮基三乙酸琼脂糖亲和层析介质纯化及梯度透析复性获得可溶性重组蛋白;利用小鼠免疫实验、酶联免疫吸附试验、免疫印迹、补体介导的血清杀菌试验及免疫荧光共聚焦显微镜,系统评价蛋白的表面暴露性、免疫效价、交叉反应性及免疫保护性.结果 5'-NT 在弧菌属具有较高的序列保守性.成功构建了 5'-NT 重组质粒,通过诱导表达、纯化获得高纯度重组 5'-核苷酸酶蛋白.重组 5'-NT 与副溶血性弧菌全菌免疫血清效价为 1:81k,具有表面暴露性.重组 5'-NT 免疫血清对 5'-NT 蛋白效价在 1:81k,对副溶血性弧菌效价在 1:3k,与其他弧菌属大多存在微弱的交叉反应,且免疫血清仅有较弱的补体依赖杀菌活性(1:4).免疫印迹表明,5'-NT 免疫血清能对副溶血性弧菌及其他弧菌全菌蛋白产生特异性条带.免疫荧光共聚焦显微镜分析也表明了重组 5'-NT 免疫血清能够与副溶血性弧菌发生特异性结合,也说明该蛋白具有表面暴露性.结论 副溶血性弧菌 5'-NT 虽具有弧菌保守性和表面暴露性特征,但较低的免疫血清效价说明其暴露性、免疫原性或表达丰度有限,限制了其单独作为疫苗或检测抗原的应用,后续可通过多抗原联合等策略挖掘其在副溶血性弧菌防控中的价值.本研究揭示了副溶血性弧菌外膜蛋白 5'-NT 的表面暴露性、免疫原性和血清保护性,为副溶血性弧菌诊断抗原和亚单位疫苗开发提供了参考.