多重聚合酶链式反应技术在热加工肉制品真实性检测中的应用
Application of multiplex polymerase chain reaction technology in the authenticity detection of heat-processed meat products
摘要目的 建立多重聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术在单一反应体系中同时鉴别多种肉类的高效检测方法.方法 基于动物线粒体基因序列的物种特异性差异,采用多软件协同设计与筛选引物,构建八重 PCR 体系,实现对羊肉、鸡肉、兔肉、鸽肉、鹅肉、火鸡肉、鸵鸟肉和狗肉 8 种肉类来源的同步检测.通过条件优化和 DNA 测序验证扩增结果的特异性,并在多物种 DNA 混合模板及掺假模型肉样中对方法的灵敏度与适用性进行评价.结果 多重 PCR 可在单一反应管内稳定扩增 8 种目标物种 DNA,未发现非特异性扩增;测序结果与对应物种一致.灵敏度结果表明,在生肉及热加工肉样品中,各目标物种 DNA 的最低检出限为 0.01~0.05 ng,在掺假样品中目标肉类含量低至 0.10%仍可检出.结论 所建立的多重 PCR 方法可成功应用于市售肉制品样品的真实性检测,能够实现多种肉类来源的快速、准确鉴别,具有良好的实际应用价值,可为食品安全监测与市场监管提供技术支撑.
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