牛乳主要过敏原αS1-酪蛋白的纯化鉴定及其多克隆抗体的制备

Purification, Identification and Polyclonal Antibody Development for Cow's Milk Major Allergen αS1-Casein

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摘要目的:从牛乳酪蛋白中纯化获得αS1-酪蛋白并对其进行综合鉴定,以及制备特异性识别αS1-酪蛋白的兔多克隆抗体.方法:采用DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析色谱对αS1-酪蛋白进行分离纯化,利用酪蛋白的理化性质(等电点和含量)、免疫学技术和质谱技术对纯化的αS1-酪蛋白进行综合鉴定,然后通过透析和冷冻干燥获得高纯度的αS1-酪蛋白,最后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,并分析其特异性.结果:在4种酪蛋白中,αS1-酪蛋白在阴离子交换层析色谱中的出峰时间最晚、峰面积最大,在电泳图中的位置最高,最终获得纯度高达94.26％的αS1-酪蛋白,得率为27.19％.免疫5次后,两只兔子的抗血清效价分别为128万和32万,抗血清除了与大豆蛋白存在轻微交叉反应(<0.25％)外,与α-乳白蛋白、β-乳球蛋白、蛋清蛋白、花生蛋白均无交叉反应,表明特异性高.结论:本研究制备了高纯度的αS1-酪蛋白及其高特异性的多克隆抗体,为过敏原蛋白的纯化与综合鉴定提供了思路,为αS1-酪蛋白免疫学检测方法的建立提供了物质基础.

作者 何圣发 ^[1] 龙彩云 ^[2] 王娇 ^[3] 熊梦 ^[3] 赵江强 ^[3] 燕燕 ^[3] 董亚萍 ^[3] 李欣 ^[4] 陈红兵 ^[5] 学术成果认领

作者单位 赣南医学院公共卫生与健康管理学院,江西赣州 341000;南昌大学食品科学与技术国家重点实验室,江西南昌 330047 ^[1] 赣州市疾病预防控制中心,江西赣州 341000 ^[2] 赣南医学院公共卫生与健康管理学院,江西赣州 341000 ^[3] 南昌大学食品科学与技术国家重点实验室,江西南昌 330047;南昌大学食品学院,江西南昌 330047 ^[4] 南昌大学食品科学与技术国家重点实验室,江西南昌 330047;南昌大学中德联合研究院,江西南昌 330047 ^[5]

关键词牛乳过敏原 αS1-酪蛋白纯化鉴定多克隆抗体

分类号 TS201.6

栏目名称

研究与探讨

DOI 10.13386/j.issn1002-0306.2021110034

发布时间 2022-08-11

基金项目

赣南医学院博士启动课题（QD201809）；赣南医学院重点科研课题（ZD201816）；南昌大学食品科学与技术国家重点实验室开放课题（SKLF-KF-202003）；江西省自然科学基金（20202BAB215013）；国家自然科学基金（32160606）